當(dāng)實(shí)驗(yàn)真正開(kāi)始時(shí)，很多實(shí)驗(yàn)人員都會(huì)遇到一個(gè)幾乎無(wú)法避免的問(wèn)題—— 細(xì)胞污染。
輕則影響細(xì)胞狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)， 重則導(dǎo)致整批細(xì)胞報(bào)廢，實(shí)驗(yàn)周期被迫重新開(kāi)始。
那么，細(xì)胞培養(yǎng)中的污染究竟從哪里來(lái)？又該如何識(shí)別和避免？
01為什么細(xì)胞培養(yǎng)特別容易污染？
細(xì)胞培養(yǎng)（Cell Culture），是指在體外人工控制的條件下，為細(xì)胞提供適宜的生存環(huán)境，使其能夠存活、增殖，并盡可能保持其原有的生物學(xué)特性。
簡(jiǎn)單理解，就是：細(xì)胞培養(yǎng)體系本質(zhì)上是一個(gè)非常適合微生物生長(zhǎng)的環(huán)境。培養(yǎng)基中富含：
?葡萄糖
?氨基酸
?維生素
?血清蛋白
同時(shí)培養(yǎng)箱還提供：
?37℃恒溫
?穩(wěn)定濕度
?適宜氣體環(huán)境
這些條件不僅適合細(xì)胞生長(zhǎng)，同樣也非常適合細(xì)菌、真菌等微生物快速繁殖。一旦污染發(fā)生，污染微生物會(huì)：與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)、改變培養(yǎng)液 pH、釋放代謝產(chǎn)物影響細(xì)胞狀態(tài)最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡或?qū)嶒?yàn)結(jié)果失真
因此，在細(xì)胞培養(yǎng)中，無(wú)菌操作始終是最核心的基本原則之一。
02細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)的 4 種污染
細(xì)菌污染通常發(fā)展非常迅速，是實(shí)驗(yàn)室中最常見(jiàn)的污染類(lèi)型。
常見(jiàn)表現(xiàn)：
?培養(yǎng)液快速變渾濁
?培養(yǎng)基顏色變黃
?顯微鏡下可見(jiàn)大量微小顆粒快速運(yùn)動(dòng)
常見(jiàn)來(lái)源：
?操作過(guò)程中無(wú)菌控制不嚴(yán)格
?槍頭、移液管或培養(yǎng)瓶口接觸污染
?培養(yǎng)基或血清污染
一旦發(fā)生細(xì)菌污染，通常不建議繼續(xù)培養(yǎng)，應(yīng)及時(shí)廢棄污染細(xì)胞并徹底清潔培養(yǎng)設(shè)備。
真菌污染雖然發(fā)生頻率低于細(xì)菌，但擴(kuò)散速度同樣很快。
常見(jiàn)表現(xiàn)：
?培養(yǎng)液中出現(xiàn)絮狀或棉絮狀漂浮物
?顯微鏡下可見(jiàn)絲狀或分枝結(jié)構(gòu)
?細(xì)胞貼壁狀態(tài)明顯變差
真菌孢子廣泛存在于空氣中，因此在操作過(guò)程中暴露時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或操作環(huán)境不潔凈，都可能增加污染風(fēng)險(xiǎn)。
支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中最隱蔽、也最容易被忽視的問(wèn)題之一。
與細(xì)菌或真菌不同，支原體污染通常不會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)液渾濁，因此肉眼很難發(fā)現(xiàn)。
可能出現(xiàn)的情況包括：
?細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯變慢
?細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化
?實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重復(fù)性下降
因此，實(shí)驗(yàn)室通常需要定期進(jìn)行支原體檢測(cè)，確保細(xì)胞體系的可靠性。
除了微生物污染外，細(xì)胞系之間的交叉污染也是實(shí)驗(yàn)室中需要警惕的問(wèn)題。
例如：
?不同細(xì)胞同時(shí)操作
?標(biāo)識(shí)管理不規(guī)范
?移液器或槍頭使用不當(dāng)
都可能導(dǎo)致細(xì)胞系混雜，最終影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
03如何降低細(xì)胞培養(yǎng)污染風(fēng)險(xiǎn)？
在細(xì)胞培養(yǎng)中，與其事后補(bǔ)救，不如從源頭控制風(fēng)險(xiǎn)。
常見(jiàn)的預(yù)防措施包括：
規(guī)范操作流程
?在生物安全柜中完成操作
?減少培養(yǎng)容器暴露時(shí)間
?定期清潔培養(yǎng)箱和實(shí)驗(yàn)環(huán)境
建立良好的細(xì)胞管理習(xí)慣
?定期進(jìn)行支原體檢測(cè)
?合理進(jìn)行細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
?避免不同細(xì)胞系同時(shí)操作
選擇穩(wěn)定可靠的培養(yǎng)耗材
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中使用的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、移液管及離心管等耗材，本身也是細(xì)胞培養(yǎng)體系的重要組成部分。
04 耐思細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)耗材
在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)耗材可以有效降低人為操作帶來(lái)的不確定性。
?細(xì)胞培養(yǎng)瓶 / 培養(yǎng)板
?高透明度，便于觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)與貼壁狀態(tài)
?穩(wěn)定的表面性能，支持貼壁細(xì)胞培養(yǎng)需求
?針對(duì)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)需求，耐思細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)耗材提供 TC 處理與未 TC 處理 兩種規(guī)格，可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景靈活選購(gòu)。
?TC（Tissue Culture）表面處理通過(guò)對(duì)高品質(zhì)聚苯乙烯（PS）基材表面進(jìn)行受控改性，在不添加生物涂層的前提下提升表面親水性并引入穩(wěn)定極性官能團(tuán)，從而增強(qiáng)細(xì)胞附著能力，促進(jìn)貼壁細(xì)胞快速鋪展與穩(wěn)定生長(zhǎng)。
?離心管 / 凍存管
?良好密封性，降低細(xì)胞轉(zhuǎn)移與儲(chǔ)存過(guò)程中的風(fēng)險(xiǎn)
?適用于細(xì)胞收集、凍存及復(fù)蘇等基礎(chǔ)操作
?血清移液管 / 吸頭
?內(nèi)壁光滑，液體殘留少
?超強(qiáng)疏水性、超低吸附性
?幫助降低人為操作帶來(lái)的不確定因素
產(chǎn)品細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)耗材均保證：
?無(wú)菌
?無(wú)熱源/內(nèi)毒素
?無(wú)細(xì)胞毒性、
?無(wú) DNA、無(wú) DNase/RNase
在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，污染并不是偶然事件，而是最常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)挑戰(zhàn)之一。理解污染來(lái)源、建立規(guī)范操作習(xí)慣，并配合穩(wěn)定可靠的實(shí)驗(yàn)耗材，是保持細(xì)胞培養(yǎng)體系長(zhǎng)期穩(wěn)定的關(guān)鍵。
